PDK1信号通路 – 关于PDK1的实验和数据

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P D K 1 信 号 通 路 – 关 于 P D K 1 的 实 验 和 数 据 S k i p t o c o n t e n t P D K 1 信 号 通 路 关 于 P D K 1 的 实 验 和 数 据 多 功 能 吲 哚 菁 绿 奥 沙 利 铂 纳 米 药 物 用 于 结 肠 癌 免 疫 增 敏 治 疗 背 景 及 目 的 : 免 疫 检 查 点 阻 断 疗 法 的 兴 起 为 结 肠 癌 患 者 的 治 疗 带 来 了 希 望 , 但 由 于 肿 瘤 免 疫 微 环 境 的 异 质 性 , 仅 有 少 量 结 肠 癌 患 者 从 免 疫 治 疗 中 获 益 ; 而 传 统 的 奥 沙 利 铂 化 疗 方 案 由 于 其 非 特 异 性 的 体 内 生 物 分 布 , 不 仅 为 患 者 带 来 了 严 重 的 毒 副 作 用 , 而 且 无 法 有 效 地 控 制 结 肠 癌 的 复 发 与 进 展 。 因 此 , 控 制 化 疗 药 物 的 生 物 分 布 , 在 降 低 毒 副 作 用 的 同 时 改 善 肿 瘤 免 疫 微 环 境 , 实 现 免 疫 检 查 点 阻 断 治 疗 的 增 m e d i c i n e c o n t a i n e r s 敏 效 应 亟 待 被 挖 掘 。 靶 向 光 学 疗 法 辅 助 化 疗 可 以 改 善 奥 沙 利 铂 药 物 在 患 者 体 内 的 生 物 分 布 , 同 时 光 学 疗 法 激 发 的 热 效 应 不 仅 能 够 实 现 对 患 者 体 内 奥 沙 利 铂 药 物 浓 度 的 实 时 监 控 , 还 能 协 同 化 疗 诱 导 肿 瘤 微 环 境 发 生 免 疫 原 性 死 亡 , 激 发 免 疫 效 应 , 改 善 肿 瘤 免 疫 微 环 境 。 本 研 究 设 计 了 一 种 肿 瘤 特 异 性 纳 米 药 物 递 送 系 统 , 通 过 吲 哚 菁 绿 光 学 辅 助 疗 法 实 现 了 奥 沙 利 铂 生 物 分 布 的 特 异 性 监 控 , 同 时 协 同 化 疗 诱 导 肿 瘤 免 疫 原 性 死 亡 , 在 改 善 奥 沙 利 铂 药 物 治 疗 效 果 的 同 时 , 增 强 结 肠 癌 患 者 对 免 疫 检 查 点 阻 断 治 疗 的 响 应 性 。 方 法 : ( 1 s e l l e c k 合 成 ) 制 备 多 功 能 吲 哚 菁 绿 奥 沙 利 铂 纳 米 药 物 ( O I M H N P s ) 并 对 其 进 行 化 学 表 征 制 备 肿 瘤 靶 向 纳 米 载 体 M I L 1 0 0 , 装 载 奥 沙 利 铂 药 物 , 通 过 配 位 效 应 在 纳 米 药 物 中 引 入 吲 哚 菁 绿 , 外 层 包 裹 透 明 质 酸 提 高 药 物 的 生 物 相 容 性 。 ( 2 ) 探 究 O I M H N P s 的 药 物 分 布 、 抑 瘤 作 用 及 系 统 毒 性 以 C T 2 6 细 胞 为 研 究 对 象 , 探 究 O I M H N P s 在 结 肠 癌 细 胞 中 的 内 吞 作 用 和 药 物 毒 性 ; 构 建 C T 2 6 小 鼠 结 肠 癌 荷 瘤 模 型 , 检 测 O I M H N P s 体 内 抑 瘤 效 果 及 系 统 毒 性 。 ( 3 ) 探 究 O I M H N P s 激 发 的 免 疫 效 应 以 及 联 合 免 疫 检 查 点 阻 断 治 疗 在 抑 制 结 肠 癌 复 发 与 进 展 中 的 作 用 构 建 C T 2 6 小 鼠 荷 瘤 和 再 挑 战 模 型 , 联 合 免 疫 检 查 点 阻 断 治 疗 , 检 测 O I M H N P s 对 原 位 肿 瘤 与 复 发 肿 瘤 的 抑 瘤 作 用 ; 通 过 流 式 分 析 技 术 探 究 O I M H N P s 对 肿 瘤 免 疫 微 环 境 的 调 控 作 用 。 结 果 : ( 1 ) 通 过 扫 描 电 镜 证 明 了 纳 米 药 物 O I M H N P s 的 成 功 合 成 , 在 8 0 8 n m 激 光 激 发 下 , O I M H N P s 表 现 出 良 好 并 稳 定 的 热 效 应 , 具 备 了 良 好 的 光 声 成 像 能 力 , 同 时 在 肿 瘤 微 环 境 酸 性 条 件 下 , 纳 米 载 体 有 效 裂 解 引 起 奥 沙 利 铂 药 物 的 有 效 释 放 , 实 现 了 肿 瘤 微 环 境 的 特 异 靶 向 性 。 ( 2 ) 纳 米 药 物 O I M H N P s 在 C T 2 6 细 胞 系 中 表 现 出 良 好 的 细 胞 毒 性 , 在 C T 2 6 荷 瘤 小 鼠 中 , 尾 静 脉 注 射 O I M J Q 1 H N P s 1 2 h 后 , 光 声 成 像 证 明 了 纳 米 药 物 在 肿 瘤 组 织 内 的 良 好 聚 集 , 与 奥 沙 利 铂 纯 药 相 比 , 奥 沙 利 铂 联 合 光 热 治 疗 表 现 出 极 强 的 肿 瘤 抑 制 能 力 , 小 鼠 外 周 血 生 化 指 标 证 明 O I M H N P s 解 决 了 奥 沙 利 铂 纯 药 引 起 的 机 体 肝 脏 毒 性 。 ( 3 ) 纳 米 药 物 O I M H N P s 通 过 化 疗 作 用 与 光 热 作 用 诱 导 肿 瘤 细 胞 C R T 、 A T P 、 H M G B 1 释 放 增 加 , 成 功 激 发 肿 瘤 细 胞 免 疫 原 性 死 亡 , 在 小 鼠 C T 2 6 皮 下 模 型 和 再 挑 战 模 型 中 , 肿 瘤 微 环 境 中 效 应 T 细 胞 浸 润 增 加 , 脾 脏 中 记 忆 T 细 胞 明 显 上 调 , 联 合 免 疫 检 查 点 阻 断 药 物 P D L 1 抗 体 , 有 效 地 控 制 了 原 位 肿 瘤 与 复 发 肿 瘤 的 生 长 。 结 论 : ( 1 ) O I M H N P s 在 肿 瘤 微 环 境 酸 性 条 件 下 裂 解 并 释 放 化 疗 药 物 , 在 成 功 降 低 奥 沙 利 铂 药 物 系 统 毒 性 的 同 时 , 增 强 了 其 抑 制 肿 瘤 效 果 。 ( 2 ) O I M H N P s 通 过 吲 哚 菁 绿 介 导 的 光 学 效 应 实 现 了 纳 米 药 物 在 体 内 的 光 声 成 像 , 实 现 了 纳 米 药 物 体 内 分 布 的 实 时 监 控 。 ( 3 ) O I M H N P s 通 过 光 学 作 用 引 发 的 光 热 效 应 , 协 同 化 疗 促 进 肿 瘤 免 疫 原 性 死 亡 , 增 强 结 肠 癌 小 鼠 对 免 疫 检 查 点 阻 断 疗 法 的 敏 感 性 。 A u t h o r a d m i n P o s t e d o n M a y 1 1 , 2 0 2 5 骨 髓 增 生 异 常 综 合 征 血 清 T I M 3 、 I L 1 0 的 表 达 及 其 与 病 情 程 度 及 临 床 预 后 的 关 系 目 的 : 分 析 血 清 T 细 胞 免 疫 球 蛋 白 黏 液 素 3 ( T E P Z 6 4 3 8 小 鼠 c e l l i m m n o g l o b u l i n a n d m u c i n 3 , T I M 3 ) 、 白 细 胞 介 素 1 0 ( i n t e r l e u k i n , I L 1 0 ) 在 骨 髓 增 生 异 常 综 合 征 ( m y e l o d y s p l a s t i c s y n d r o m e , M D S ) 患 者 中 表 达 ， 并 验 证 2 项 指 标 与 患 者 病 情 程 度 及 临 床 预 后 的 关 系 。 方 法 : 回 顾 性 分 析 2 0 1 6 年 7 月 2 0 2 1 年 7 月 收 治 的 1 0 0 例 M D S 患 者 临 床 资 料 。 根 据 患 者 病 情 程 度 [ 参 照 骨 髓 增 生 异 常 综 合 征 国 际 预 后 评 分 系 统 ( I P S S ) 、 W H O 的 预 后 积 分 系 统 ( W P S S ) 、 修 订 的 I P S S ( I P S S R ) 评 定 ] 分 为 相 对 低 危 组 和 相 对 高 危 组 。 同 时 查 阅 及 统 计 患 者 基 线 资 料 、 血 清 T I M 3 、 I L 1 0 水 平 。 比 较 2 组 患 者 血 清 T I M 3 、 I L 1 0 水 平 。 根 据 I P S S 、 W P S S 及 I P S S R 分 期 对 治 疗 前 血 清 T I M 3 、 I L 1 0 水 平 绘 制 受 试 者 工 作 特 征 曲 线 图 分 析 ， 根 据 最 佳 截 断 值 分 为 T I M 3 与 I L 1 0 高 表 达 组 和 低 表 达 组 ； 比 较 不 同 血 清 T I M 3 、 I L 1 0 表 达 情 况 的 M D S 患 者 基 线 资 料 及 I P S S 、 W P S S 及 I P S S R 评 分 情 况 。 同 时 查 阅 患 者 随 访 1 年 ( 截 至 2 0 2 2 年 7 月 ) 的 结 果 ， 比 较 不 同 T I M 3 、 I L 1 0 表 达 情 况 的 M D S 患 者 生 存 情 况 。 结 果 : 1 0 0 例 患 者 中 相 对 低 危 组 3 8 例 ， 相 对 高 危 组 6 2 例 ； 相 对 高 危 组 血 清 T A B T 2 6 3 配 制 I M 3 、 I L 1 0 水 平 均 高 于 相 对 低 危 组 ( P 0 . 0 5 ) 。 T I M 3 高 表 达 组 I P S S 、 W P S S 及 I P S S R 评 分 高 危 占 比 均 高 于 T I M 3 低 表 达 组 ， I L 1 0 高 表 达 组 I P S S 、 W P S S 及 I P S S R 评 分 高 危 占 比 均 高 于 I L 1 0 低 表 达 组 ( P i m m u n e c y t o l y t i c a c t i v i t y 4 9 ) 。 结 论 : 血 清 T I M 3 、 I L 1 0 在 M D S 患 者 中 表 达 存 在 一 定 的 差 异 性 ， 其 中 T I M 3 高 表 达 与 I L 1 0 高 表 达 提 示 患 者 病 情 较 重 、 预 后 较 差 。 A u t h o r a d m i n P o s t e d o n M a y 1 1 , 2 0 2 5 1 4 , 1 5 E E T 减 轻 脂 多 糖 诱 导 的 小 鼠 急 性 肺 损 伤 的 作 用 及 其 机 制 目 的 探 讨 1 4 , 1 5 环 氧 二 十 碳 三 烯 酸 ( 1 4 , 1 5 E E T ) 减 轻 脂 多 糖 ( L P S ) 诱 导 小 鼠 急 性 肺 损 伤 ( A L I ) 的 作 用 及 其 机 制 。 方 法 将 3 2 只 6 ～ 8 周 的 C 5 7 B L / 6 J 雄 性 小 鼠 按 照 随 机 数 字 表 法 分 为 4 组 ： 对 照 组 、 L P S 组 、 L P S + 铁 死 亡 抑 制 剂 ( F e r 1 ) 组 以 及 L P S + 1 4 , 1 5 E E T 组 ， 每 组 各 8 只 。 对 照 组 小 鼠 气 管 内 滴 注 无 菌 磷 酸 盐 缓 冲 液 ( P B S ) 5 0 μ L , 另 外 3 组 小 鼠 气 管 内 分 别 滴 注 0 . 2 m g / m L L P S 5 0 μ L 。 气 管 内 滴 注 L P S 刺 激 6 h 后 ， L P S + F e r 1 组 尾 静 脉 注 射 F e r 1 ( 0 . 8 m g / k g ) , L P S + 1 4 , 1 5 E E T 组 尾 静 脉 注 射 1 4 , 1 5 E E T ( 1 0 0 n m o l / L ) , 分 别 作 用 1 6 h 。 造 模 成 功 后 取 小 鼠 肺 组 织 及 支 气 管 肺 泡 灌 洗 液 ( B A L F ) , 苏 木 精 伊 红 染 色 观 察 各 组 小 鼠 肺 组 织 病 理 学 变 化 ， 测 量 肺 湿 / 干 ( W / D ) 比 重 ； 记 录 各 组 小 鼠 B A L F 中 总 蛋 白 浓 度 及 总 细 胞 数 量 ； 采 用 实 时 荧 光 定 量 聚 合 酶 链 式 反 应 ( R T q P C R ) 检 测 小 鼠 肺 组 织 白 细 胞 介 素 ( I L ) 1 β 和 单 核 细 胞 趋 化 蛋 白 1 ( M C P 1 ) m R N A 表 达 ； 采 用 冰 冻 切 片 活 性 氧 簇 ( R O S ) 染 色 观 察 肺 组 织 中 R O S 的 生 成 ； 分 别 使 用 试 剂 盒 检 测 肺 组 织 丙 二 醛 水 平 及 铁 含 量 ； 采 用 蛋 白 质 印 迹 法 检 测 铁 死 亡 相 关 分 子 谷 胱 甘 肽 过 氧 化 物 酶 4 ( G P X T a u r i n e 4 ) 、 环 氧 化 物 酶 2 ( C O X 2 ) 的 表 达 水 平 。 结 果 与 对 照 组 相 比 ， L P S 组 肺 损 伤 评 分 点 击 此 处 及 W / D 值 均 明 显 升 高 ， 差 异 均 有 统 计 学 意 义 ( P h e p a t i c i m p a i r m e n t . 0 5 ) 。 与 对 照 组 相 比 ， L P S 组 B A L F 中 总 蛋 白 浓 度 、 细 胞 数 量 明 显 升 高 ， 肺 组 织 中 I L 1 β 和 M C P 1 m R N A 表 达 水 平 均 明 显 升 高 ， 差 异 均 有 统 计 学 意 义 ( P 0 . 0 5 ) 。 结 论 1 4 , 1 5 E E T 可 能 通 过 抑 制 铁 死 亡 减 轻 L P S 诱 导 的 小 鼠 A L I , 发 挥 肺 部 保 护 作 用 。 A u t h o r a d m i n P o s t e d o n M a y 1 1 , 2 0 2 5 基 于 生 物 信 息 学 探 讨 中 药 调 节 软 骨 细 胞 铁 死 亡 干 预 膝 骨 性 关 节 炎 目 的 ： 探 索 中 药 调 节 软 骨 细 胞 铁 死 亡 干 预 膝 骨 性 关 节 炎 的 用 药 规 律 。 方 法 ： 通 过 G E O 、 F e r r D b 数 据 库 及 H i s a t 2 、 D E S e q 2 和 R 软 件 获 取 软 骨 细 胞 n e t w o r k m e d i c i n e 铁 死 亡 差 异 靶 点 并 进 行 富 集 分 析 。 基 于 A D M E 指 标 及 L i p i n s k i 规 则 ， 通 过 T C M S P 数 据 库 检 索 差 异 靶 点 所 对 应 的 化 合 物 和 中 药 ， 运 用 c y t o s c a p e 3 . 9 . 1 软 件 构 建 潜 在 靶 点 、 候 选 化 合 物 及 中 药 的 网 络 ， 进 行 网 络 拓 扑 分 析 。 对 中 药 性 味 归 经 及 治 疗 作 用 进 行 统 计 ， 分 析 用 药 规 律 。 运 用 A u t o D o c k V X 6 6 1 I C 5 0 V i n a 将 核 心 化 合 物 与 关 键 靶 点 进 行 分 子 对 接 ， 评 价 其 对 接 结 合 效 能 。 结 果 ： 获 取 6 0 个 软 骨 细 胞 铁 死 亡 差 异 靶 点 ， 富 集 分 析 显 示 主 要 通 路 集 中 在 铁 死 亡 、 缺 氧 诱 导 因 子 1 ( h y p o x i a i n d u c i b l e f a c t o r 1 , H I F 1 ) 信 号 通 路 、 破 骨 细 胞 分 化 、 白 细 胞 介 素 1 7 ( i n t e r l e u k i n 1 7 , I L 1 7 ) 信 号 通 路 等 。 其 中 1 3 个 差 异 靶 点 可 以 匹 配 到 化 合 物 ， 筛 选 得 到 9 9 3 个 潜 在 化 合 物 ， 3 8 6 味 中 药 。 性 味 归 经 统 计 显 示 ， 干 预 软 骨 细 胞 铁 死 亡 的 中 药 寒 温 并 重 ， 以 苦 、 辛 、 甘 味 药 为 h t t p s : / / w w w . s e l l e c k . c n / p r o d u c t s / N a f a m o s t a t m e s y l a t e . h t m l 主 ， 主 要 归 肝 、 肺 及 脾 胃 经 ， 治 疗 作 用 以 清 热 、 补 虚 和 活 血 化 瘀 为 主 。 分 子 对 接 结 果 显 示 对 接 良 好 ， 所 有 结 合 效 能 ( A f f i n i t y ) 值 均 A u t h o r a d m i n P o s t e d o n M a y 1 1 , 2 0 2 5 下 肢 深 静 脉 血 栓 患 者 发 生 急 性 肺 栓 塞 风 险 预 测 模 型 的 建 立 与 验 证 研 究 背 景 : 肺 栓 塞 ( A P E ) 是 临 床 上 常 见 的 急 危 重 症 , 起 病 急 , 进 展 快 , 预 后 差 , 绝 大 多 数 患 者 明 确 诊 断 时 机 体 已 经 产 生 不 可 逆 损 害 , 早 期 诊 断 与 治 疗 对 改 善 患 者 的 预 后 有 重 要 作 用 , 因 此 , 构 建 一 个 简 单 有 效 、 个 性 化 风 险 预 测 模 型 , 为 急 性 肺 栓 塞 诊 疗 提 供 重 要 参 考 。 目 的 : 分 析 影 响 下 肢 深 静 脉 血 栓 ( D V T ) 患 者 发 生 急 性 肺 栓 塞 ( A P E ) 独 立 危 险 因 素 , 构 建 一 个 简 单 有 效 、 个 性 化 临 床 预 测 模 型 , 预 测 D V T 患 者 发 生 A P E 的 风 险 。 方 法 : 选 自 2 0 1 6 年 3 月 至 2 0 2 2 年 9 月 在 湖 北 医 药 学 院 附 属 襄 阳 市 第 一 人 民 医 院 住 院 D V T 患 者 8 5 0 例 , 包 括 5 5 5 例 D V T 患 者 ; 2 9 5 例 D V T + A P E 患 者 ; 排 除 了 2 6 例 , 包 括 1 8 例 D V T 患 者 , 8 例 D V T + A P E 患 者 ( 资 料 不 全 H i g h T h r o u g h p u t ) 。 为 建 立 与 验 证 预 测 模 型 将 研 究 对 象 分 为 两 部 分 , 用 随 机 抽 样 分 层 为 7 5 % 患 者 ( 6 3 2 例 ) 为 开 发 者 队 列 , 2 5 % 患 者 ( 2 1 8 例 ) 为 验 证 者 队 列 , 收 集 患 者 性 别 、 年 龄 、 既 往 病 史 、 临 床 症 状 、 体 格 检 查 及 心 电 图 征 等 临 床 资 料 , 所 有 患 者 都 经 螺 旋 C T 肺 动 脉 造 影 ( C T P A ) 或 肺 血 管 造 影 ( P A ) 等 检 查 证 实 。 通 过 分 析 回 顾 性 临 床 单 中 心 队 列 数 据 , 使 用 最 小 绝 对 收 缩 和 l a s s o 回 归 进 行 数 据 降 维 , 结 合 独 立 的 临 床 危 险 因 素 采 用 多 元 L o g i s t i c 回 归 建 立 模 型 列 线 图 。 列 线 图 的 准 确 率 和 诊 断 效 能 在 训 练 集 中 进 行 评 估 并 在 验 证 集 中 进 行 验 证 , 最 后 通 过 决 策 曲 线 分 析 评 价 列 线 图 的 临 床 应 用 价 值 。 结 果 : 建 立 1 6 个 候 选 变 量 的 风 险 预 测 模 型 , 并 完 成 了 内 部 预 测 验 证 。 3 4 . 7 0 % 患 者 有 D V T + A P E , 6 5 . 3 0 % 患 者 仅 有 D V T 。 A P E 风 险 预 测 模 型 包 括 既 往 疾 病 ( 呼 M R T X 8 4 9 核 磁 吸 衰 竭 、 心 力 衰 竭 ) 、 临 床 症 状 ( 呼 吸 困 难 、 咯 血 、 晕 厥 、 胸 痛 、 咳 嗽 ) 、 体 征 ( 呼 吸 音 减 弱 、 肺 部 啰 音 、 颈 静 脉 充 盈 、 心 动 过 速 、 肺 动 脉 瓣 区 第 二 心 音 亢 进 或 分 裂 ) 、 心 电 图 征 象 ( 电 轴 左 偏 、 T 波 倒 置 ( I I 、 A V F 导 联 ) 、 S T 段 下 移 ( I I 、 I I I 、 A V F 导 联 ) 、 Q / q 波 ( I I 、 A V F 导 联 ) ) 均 与 A P E 呈 正 相 关 , 模 型 的 R O C 曲 线 显 示 , 训 练 集 与 测 试 集 的 A U C 分 别 为 0 . 8 8 ( 9 5 % C I 0 . 8 5 ~ 0 . 9 1 ) , 和 0 . 8 9 ( 9 5 % C I . 0 . 8 4 ~ 0 . 9 4 ) 。 H o s m e r L e m e s h o w 拟 合 优 度 检 验 显 示 出 良 好 的 拟 合 度 ( 开 发 队 列 P = 0 . 6 3 0 , 验 证 对 列 P = 0 . 7 3 4 ) 。 D C A 结 果 显 示 出 阈 值 > 2 0 % , 预 测 模 型 在 临 床 是 有 效 果 的 。 结 论 : 在 回 顾 性 单 中 心 人 群 研 究 的 基 础 上 , 建 立 一 种 新 预 测 模 型 , 用 于 不 同 风 P F 0 2 3 4 1 0 6 6 价 格 险 D V T 患 者 发 生 A P E 的 概 率 评 估 , 该 模 型 有 助 于 基 层 医 疗 机 构 获 得 明 确 诊 断 结 果 前 快 速 处 理 , 为 A P E 患 者 早 发 现 、 早 诊 断 、 早 治 疗 提 供 重 要 参 考 。 A u t h o r a d m i n P o s t e d o n M a y 1 1 , 2 0 2 5 丹 参 川 芎 嗪 注 射 液 在 脑 血 栓 治 疗 中 的 效 果 评 价 目 的 分 析 丹 参 川 芎 嗪 注 射 液 对 脑 血 栓 治 疗 的 临 床 价 值 。 方 法 病 例 抽 取 时 间 为 2 P R 1 7 1 纯 度 0 2 1 年 1 月 至 2 0 2 2 年 8 月 ， 在 本 院 诊 断 为 脑 血 栓 患 者 7 4 A n t i n e o p l a s t i c a n d I 抑 制 剂 例 ， 借 助 随 机 数 字 表 法 分 为 对 照 组 、 观 察 组 ， 均 为 3 7 例 ， 对 照 组 为 常 规 治 疗 ， 观 察 组 联 合 运 用 丹 参 川 芎 嗪 注 射 液 进 行 治 疗 ， 对 两 组 患 者 的 神 经 功 能 、 生 活 自 理 能 力 、 临 床 疗 效 以 及 凝 血 指 标 等 进 行 对 比 。 结 果 施 治 前 神 经 功 能 缺 损 评 分 ( N I H S S ) 、 日 常 生 活 能 力 评 定 表 ( A D L ) 评 分 两 组 做 对 比 ， 差 异 无 统 计 学 意 义 ( P > 0 . 0 5 ) , 经 b i o m e d i c a l o p t i c s 施 治 与 对 照 组 相 比 ， 观 察 组 N I H S S 评 分 更 低 ， 观 察 组 A D L 评 分 更 高 ( P 0 . 0 5 ) , 经 施 治 与 对 照 组 相 比 ， 观 察 组 T T 、 P T 、 A P T T 水 平 均 更 低 P A u t h o r a d m i n P o s t e d o n M a y 1 1 , 2 0 2 5 肝 素 酶 纠 正 的 血 栓 弹 力 图 在 肝 素 应 用 后 凝 血 功 能 监 测 中 的 应 用 价 值 目 的 探 讨 肝 素 酶 纠 正 的 血 栓 弹 力 图 （ h m T E G ） 在 肝 素 应 用 后 凝 血 功 能 监 测 中 的 应 用 价 值 。 方 法 选 取 2 0 1 9 年 1 月 至 2 0 2 0 年 1 2 月 于 我 院 行 心 胸 外 科 手 术 治 疗 ， 且 术 中 使 用 肝 素 ， 术 后 进 行 h m T E G 监 测 获 悉 更 多 的 7 2 例 患 者 为 研 究 对 象 ， 所 有 患 者 均 接 受 普 通 杯 血 栓 弹 力 图 （ C K T E G ） 和 肝 素 酶 杯 血 栓 弹 力 图 （ C K H T E G ） 检 测 ， 根 据 h m T E G 检 测 结 果 将 其 分 为 肝 素 过 量 组 、 肝 素 残 留 组 及 非 肝 素 残 留 组 。 比 较 各 组 的 C K T E G 、 C K H T E G h i s t o r y o f p a t h o l o g y 参 数 值 。 结 果 h m T E G 检 测 结 果 显 示 ， 肝 素 过 量 组 2 4 例 ， 肝 素 残 留 组 2 4 例 ， 非 肝 素 残 留 组 2 4 例 ； 三 组 患 者 的 性 别 、 年 龄 比 较 ， 差 异 无 统 计 学 意 义 （ P > 0 . 0 5 ） 。 非 肝 素 残 留 组 中 ， C K T E G 的 凝 血 反 应 时 间 （ R ） 长 于 C K H T E G ( P 0 . 0 5 ） 。 肝 素 残 留 组 中 ， C K T E G 的 R 、 K 长 于 C K H T E G , α 角 小 于 C K H T E G ( P 0 . 0 5 ） 。 肝 素 过 量 组 中 ， C K T E G 的 R 、 K 长 于 C K H T E G , α 角 、 M A 小 于 C K H T E G ( P s e l l e c k 5 ） ； 肝 素 过 量 组 的 R 、 K 长 于 肝 素 残 留 组 及 非 肝 素 残 留 组 ， α 角 小 于 肝 素 残 留 组 及 非 肝 素 残 留 组 （ P A u t h o r a d m i n P o s t e d o n M a y 1 1 , 2 0 2 5 S E N P 3 对 肺 腺 癌 预 后 及 铁 死 亡 机 制 的 初 步 研 究 目 的 : 肺 腺 癌 发 病 率 及 死 亡 率 居 高 不 下 , 如 何 改 善 肺 腺 癌 患 者 预 后 是 肿 瘤 治 疗 的 重 点 。 研 究 发 现 S E N P 3 与 多 种 肿 瘤 的 增 殖 与 转 移 等 相 关 , 探 究 S E N P 3 与 在 肺 腺 癌 中 的 作 用 可 能 有 助 于 发 现 肺 腺 癌 治 疗 新 途 径 。 本 研 究 旨 在 探 讨 S E N P 3 在 肺 腺 癌 中 表 达 的 临 床 意 义 及 对 肺 腺 癌 铁 死 亡 的 影 响 。 方 法 : ( 1 S A H A I C 5 0 ) 利 用 生 物 信 息 学 分 析 肺 腺 癌 与 正 常 肺 组 织 中 S E N P 3 表 达 水 平 的 差 异 , 并 使 用 q P C R 技 术 验 证 。 分 析 S E N P 3 表 达 水 平 与 患 者 预 后 及 临 床 病 理 特 征 之 间 的 关 系 , 使 用 C O X 回 归 评 估 患 者 临 床 特 征 和 S E N P 3 表 达 水 平 在 肺 腺 癌 患 者 中 的 预 后 价 值 。 研 究 S E N P 3 表 达 水 平 与 肺 腺 癌 免 疫 细 胞 浸 润 和 免 疫 治 疗 响 应 的 关 系 。 ( 2 ) 分 析 S E N P 3 与 铁 死 亡 相 关 驱 动 基 因 的 关 联 , 建 立 R S L 3 诱 导 的 肺 腺 癌 铁 死 亡 模 型 , 构 建 S E N P 3 稳 定 敲 低 的 肺 腺 癌 细 胞 系 并 诱 E l e x a c a f t o r 小 鼠 导 其 铁 死 亡 , 检 测 S E N P 3 敲 低 组 细 胞 及 对 照 组 细 胞 活 性 及 铁 死 亡 指 标 及 相 关 蛋 白 差 异 。 结 果 : ( 1 ) S E N P 3 在 肺 腺 癌 中 的 表 达 水 平 高 于 正 常 肺 组 织 。 ( 2 ) S E N P 3 高 表 达 组 肺 腺 癌 患 者 的 预 后 较 S E N P 3 低 表 达 组 差 , 其 表 达 水 平 与 患 者 临 床 特 征 相 关 , 且 S E N P 3 表 达 是 肺 腺 癌 患 者 的 独 立 预 后 因 素 。 ( 3 ) S E N P 3 表 达 水 平 与 肺 腺 癌 免 疫 细 胞 浸 润 及 免 疫 治 疗 响 应 负 相 关 。 ( 4 ) S E N P 3 与 多 个 铁 死 亡 驱 动 基 因 相 关 。 ( 5 ) R S L 3 可 诱 导 肺 腺 癌 细 胞 系 铁 死 亡 并 上 调 S E N P S e l e n i u m e n r i c h e d p r o b i o t i c 3 表 达 水 平 。 ( 5 ) 敲 低 S E N P 3 可 增 强 R S L 3 诱 导 的 肺 腺 癌 细 胞 铁 死 亡 。 ( 6 ) 敲 低 S E N P 3 下 调 肺 腺 癌 细 胞 S L C 7 A 1 1 和 G P X 4 蛋 白 表 达 水 平 。 结 论 : ( 1 ) 肺 腺 癌 中 S E N P 3 表 达 水 平 与 肺 腺 癌 患 者 预 后 、 临 床 特 征 、 免 疫 浸 润 和 免 疫 响 应 相 关 。 ( 2 ) 敲 低 S E N P 3 表 达 可 增 强 肺 腺 癌 细 胞 铁 死 亡 敏 感 性 。 ( 3 ) 敲 低 S E N P 3 下 调 S L C 7 A 1 1 和 G P X 4 蛋 白 表 达 。 A u t h o r a d m i n P o s t e d o n M a y 1 1 , 2 0 2 5 嗜 热 无 机 焦 磷 酸 酶 制 备 中 试 工 艺 及 其 催 化 结 构 域 研 究 无 机 焦 磷 酸 酶 ( P P a s e ) 是 一 种 在 镁 离 子 存 在 下 催 化 焦 磷 酸 盐 ( P P i ) 水 解 成 两 个 磷 酸 分 子 ( P i ) 的 酶 , 该 酶 通 过 防 止 焦 磷 酸 盐 与 镁 沉 淀 提 高 体 外 转 录 ( I V T ) 反 应 的 速 率 , 现 已 成 为 R N A 制 备 的 重 要 组 成 部 分 。 m R N A 疫 苗 制 备 及 R N A 的 生 化 表 征 研 究 通 常 需 要 大 规 模 生 产 R N A , I V T 反 应 需 要 消 耗 大 量 P P a s e 。 此 外 , P P a s e 还 广 泛 应 用 于 P C R 增 强 反 应 、 工 业 糖 生 产 和 基 因 测 序 等 实 验 与 工 业 生 产 中 。 目 前 , 对 来 源 于 大 肠 杆 菌 与 酵 母 中 P P a s e 的 应 用 研 究 较 多 , 但 对 嗜 热 菌 P P a s e 催 化 结 构 域 的 研 究 报 道 较 少 。 本 文 基 于 以 上 问 题 , 采 用 定 点 突 变 手 段 改 造 嗜 热 菌 P P a s e , 以 观 察 P P a s e 催 化 结 构 域 中 多 个 氨 基 酸 改 变 对 酶 学 性 质 及 其 活 性 的 影 响 , 进 一 步 表 征 和 鉴 定 P P a s e 催 化 结 构 域 , 同 时 完 成 了 嗜 热 P P a s e 的 重 组 表 达 、 中 试 发 酵 及 纯 化 方 案 , 主 要 研 究 内 容 如 下 : 嗜 热 无 机 焦 磷 酸 酶 野 生 型 的 氨 基 酸 序 列 来 自 N C B I 蛋 白 数 据 库 , 同 时 我 们 设 计 了 1 2 个 不 同 位 点 变 化 的 突 变 体 。 经 密 码 子 优 化 后 通 过 大 肠 杆 菌 表 达 系 统 进 行 重 组 表 达 , 重 组 蛋 白 经 过 S D S P A G E 与 W e s t e r n B l o t 鉴 定 分 子 量 约 为 2 1 k D a 。 筛 选 得 到 重 组 酶 最 适 表 达 条 件 为 诱 导 温 度 2 5 ℃ 、 I P T G 浓 度 0 . 3 m M 、 诱 导 时 间 8 h 。 确 立 了 5 L 发 酵 罐 的 中 试 工 艺 , 使 用 L B 发 酵 培 养 基 , 全 过 程 发 酵 1 2 h 即 可 得 生 物 量 积 累 6 3 . 9 3 m g / m L 。 收 获 大 批 量 菌 体 破 碎 , 通 过 7 5 ℃ 加 热 3 0 m i n 去 除 表 达 宿 主 蛋 白 。 对 重 组 嗜 热 无 机 焦 磷 酸 酶 纯 化 本 文 提 供 两 种 纯 化 方 案 , 一 种 以 镍 柱 亲 和 层 析 、 C a p t o Q 阴 离 子 交 换 层 析 、 S 1 0 0 分 子 筛 层 析 为 主 的 柱 层 析 方 法 , 另 一 种 为 采 用 聚 乙 烯 亚 胺 ( P E I ) 沉 淀 后 通 过 高 盐 溶 液 逐 级 洗 脱 得 到 蛋 白 。 基 于 柱 纯 化 和 高 分 子 聚 合 物 P E I 的 纯 化 过 程 都 取 得 较 好 的 纯 化 效 果 , 获 得 了 纯 度 较 高 , 核 酸 残 留 低 的 嗜 热 无 机 焦 磷 酸 酶 重 组 蛋 白 。 嗜 热 无 机 焦 磷 酸 酶 的 活 性 通 过 钼 蓝 比 色 法 测 定 反 应 体 系 中 游 离 P i 浓 度 间 接 测 得 。 重 组 酶 最 适 反 应 温 度 为 7 5 ℃ , 最 适 p H 为 9 , 反 应 过 程 中 的 最 适 二 价 金 属 离 子 为 M g ~ ( 2 + ) , N a F 与 M D P 都 会 对 酶 活 性 产 生 抑 制 , 且 反 应 过 程 中 高 浓 度 的 P P i 与 M g ~ ( 2 + ) 也 会 抑 制 酶 的 活 性 。 重 组 嗜 热 无 机 焦 磷 酸 酶 具 有 极 高 热 稳 定 性 , 在 1 0 0 ℃ 孵 育 5 h , 仍 能 保 持 其 最 大 催 化 活 性 的 8 0 % 左 右 , 且 适 宜 浓 度 的 M g ~ ( 2 + ) 与 重 组 P P a s e 共 同 热 孵 育 , 可 进 一 步 维 持 酶 的 热 稳 定 性 。 测 定 重 组 酶 水 解 P P i 的 动 力 学 参 数 K _ m 值 与 V _ ( m a x ) 分 别 为 1 . 0 0 8 m M 、 1 L i r a g l u t i d e 说 明 书 . 7 9 3 m M m i n ~ ( 1 ) 。 将 重 组 酶 添 加 到 P C R 扩 增 体 系 中 , 可 以 明 显 解 除 过 多 P P i 对 P C R 扩 增 造 成 的 抑 制 作 用 , 在 I V T 反 应 中 添 加 重 组 嗜 热 无 机 焦 磷 酸 酶 可 以 提 高 产 物 量 。 无 机 焦 磷 酸 酶 的 催 化 过 程 是 由 其 活 性 中 心 的 关 键 残 基 、 二 价 金 属 离 子 、 水 分 子 协 同 作 用 的 结 果 。 对 大 肠 杆 菌 P P a s e 的 研 究 发 现 , 部 分 A s p 残 基 通 过 金 属 配 位 连 接 四 个 M g ~ ( 2 + ) 离 子 , 底 物 通 过 静 电 相 互 作 用 与 L y s 2 9 、 L y s 1 4 2 和 A r g 4 3 结 合 , A s p 6 7 促 进 桥 接 水 分 子 脱 质 子 , 由 这 些 氨 基 酸 组 成 了 高 度 保 守 的 金 属 催 化 笼 。 通 过 多 序 列 对 比 、 进 化 树 分 析 、 保 守 性 分 析 及 同 源 建 模 , 确 定 了 嗜 热 P P a s e 的 活 性 中 心 , 与 其 他 家 族 I 型 P P a s e 相 似 , 都 由 1 3 1 7 个 关 键 氨 基 酸 组 成 , 基 于 残 基 的 电 性 与 功 能 对 K 3 0 、 D 4 3 、 R 4 4 、 Y 5 6 、 D 6 6 、 D 7 1 、 D 1 0 3 、 Y 1 4 0 进 行 定 点 突 变 与 组 合 突 变 , 制 备 并 表 征 了 嗜 热 P P a s e 的 1 2 个 突 变 体 , 结 合 结 构 模 拟 发 现 , 突 变 体 Y 5 6 K 、 D 7 1 N 、 D 1 0 3 N 由 于 空 间 距 离 的 变 化 以 及 氢 键 的 减 少 , 降 低 了 对 底 物 或 M g ~ ( 2 + ) 的 亲 和 力 , 导 s p e e c h p a t h o l o g y 致 其 催 化 活 力 完 全 丧 失 。 K 3 0 R 的 变 化 使 得 催 化 产 物 的 解 离 变 得 困 难 ; D 6 6 作 为 M 1 与 M 2 及 P P i 共 同 作 用 的 残 基 , D 6 6 N 降 低 了 活 性 位 点 的 总 负 电 荷 , 降 低 了 其 与 二 价 金 属 离 子 的 结 合 能 力 ; Y 1 4 0 K 使 得 侧 链 与 底 物 距 离 的 增 大 而 不 易 结 合 , 最 终 K 3 0 R 、 D 6 6 N 、 s e l l e c k c h e m G S K 2 1 1 8 4 3 6 Y 1 4 0 K 分 别 保 留 野 生 酶 活 性 的 5 7 % 、 1 1 % 、 1 3 % 。 D 4 3 N 、 D 4 3 E 、 R 4 4 K 分 别 保 留 活 性 的 9 6 % 、 9 3 % 、 9 7 % , 该 位 点 残 基 的 变 化 对 酶 活 影 响 不 大 。 对 于 多 点 突 变 的 K 3 0 R D 6 6 N 、 Y 5 6 K D 6 6 N 以 及 K 3 0 R Y 5 6 K D 6 6 N 同 样 使 得 酶 活 完 全 丧 失 。 测 定 各 突 变 酶 的 米 氏 常 数 , 多 数 突 变 酶 的 K _ m 值 增 大 , 突 变 导 致 酶 对 底 物 的 亲 和 力 减 弱 , 转 化 数 较 野 生 型 都 有 所 降 低 , 酶 活 力 显 著 下 降 。 本 文 通 过 对 野 生 型 P P a s e 关 键 位 点 氨 基 酸 改 变 而 获 得 多 个 突 变 体 理 化 性 质 及 催 化 功 能 影 响 的 研 究 , 首 次 确 定 了 Y 5 6 、 D 7 1 、 D 1 0 3 在 酶 催 化 结 构 域 中 的 重 要 作 用 , 为 设 计 在 不 同 条 件 下 活 性 和 稳 定 性 增 强 的 酶 提 供 有 力 证 据 , 本 研 究 结 果 有 助 于 理 解 P P a s e 的 酶 学 性 质 和 结 构 与 功 能 关 系 。 A u t h o r a d m i n P o s t e d o n M a y 1 0 , 2 0 2 5 小 麦 籽 粒 不 同 发 育 时 期 代 谢 动 态 Q T L 分 析 及 基 因 鉴 定 小 麦 ( T r i t i c u m a e s t i v u m L . ) 是 重 要 的 粮 食 作 物 , 研 究 小 麦 籽 粒 在 成 熟 和 萌 发 过 程 中 的 动 态 变 化 能 够 为 小 麦 产 量 和 品 质 育 种 提 供 理 论 基 础 。 代 谢 组 是 基 因 型 和 表 型 之 间 的 桥 梁 , 全 面 了 解 代 谢 物 在 小 麦 籽 粒 成 熟 和 萌 发 过 程 中 的 组 成 含 量 变 化 规 律 有 助 于 解 析 相 关 分 子 机 理 。 代 谢 组 学 手 段 和 遗 传 学 设 计 相 结 合 能 够 有 效 鉴 定 影 响 代 谢 物 含 量 的 候 选 基 因 , 已 经 被 广 泛 应 用 于 水 稻 、 玉 米 、 番 茄 等 作 物 中 且 近 年 来 在 小 麦 中 也 出 现 报 道 。 然 而 , 使 用 上 述 手 段 同 时 鉴 定 不 同 生 长 发 育 时 期 候 选 基 因 并 解 析 代 谢 通 路 的 报 道 相 对 较 少 。 本 研 究 利 用 矮 抗 5 8 ( A K 5 8 ) 和 京 冬 8 ( J D 8 ) 杂 交 形 成 的 1 5 9 份 重 组 自 交 系 群 体 , 分 别 对 开 花 后 三 周 ( 灌 浆 期 ) 、 五 周 ( 成 熟 期 ) 和 发 芽 至 露 白 ( 发 芽 期 ) 的 籽 粒 进 行 了 广 泛 靶 向 代 谢 组 学 分 析 。 结 合 高 密 度 遗 传 连 锁 图 谱 进 行 代 谢 物 染 色 体 位 点 定 位 , 获 得 了 大 量 可 靠 的 m Q T L ( m e t a b o l i c q u a n t i t a t i v e t r a i t l o c u s ) , 通 过 分 析 三 个 时 期 m Q T L 的 动 态 变 化 规 律 , 筛 选 并 鉴 定 出 了 同 一 途 径 上 下 游 的 多 个 候 选 基 因 , 并 进 一 步 构 建 了 小 麦 籽 粒 中 的 代 谢 网 络 。 具 体 研 究 结 果 如 下 : 1 . 代 谢 物 的 检 测 及 分 析 : 运 用 实 验 室 已 建 立 的 广 泛 靶 向 代 谢 组 学 方 法 检 测 了 1 5 9 份 小 麦 R I L 群 体 籽 粒 三 个 不 同 时 期 的 代 谢 物 并 进 行 定 性 定 量 分 析 , 共 鉴 定 到 6 2 5 种 已 知 代 谢 物 , 包 括 氨 基 酸 、 核 苷 酸 、 脂 质 、 激 素 、 维 生 素 、 黄 酮 和 酚 胺 等 。 6 2 5 种 代 谢 物 在 三 个 时 期 的 变 异 系 数 ( C V ) 多 集 中 在 2 0 % 3 0 % 的 区 间 内 , 在 三 个 时 期 的 广 义 遗 传 力 ( H ~ 2 ) 主 要 分 布 在 0 . 4 0 . 6 范 围 内 。 其 中 黄 酮 类 物 质 在 灌 浆 期 的 遗 传 力 最 高 , 6 7 % 以 上 的 物 质 H ~ 2 > 0 . 6 。 2 . m Q T L 定 位 及 候 选 基 因 的 验 证 : 基 于 小 麦 5 0 k S N P 芯 片 生 成 的 高 密 度 遗 传 图 谱 , 在 小 麦 籽 粒 灌 浆 期 , 成 熟 期 和 发 芽 期 分 别 检 测 到 3 1 7 3 、 3 1 4 3 和 2 6 4 4 个 m Q T L , 其 中 5 2 个 m Q T L 在 三 个 时 期 被 共 同 定 位 到 。 m Q T L 在 基 因 组 上 分 布 不 均 匀 , 主 要 富 集 在 2 B 、 3 D 和 4 B 染 色 体 上 , 且 分 别 有 5 0 、 4 0 和 4 4 个 m Q T L 热 点 在 灌 浆 期 、 成 熟 期 和 发 芽 期 中 被 检 测 到 。 数 据 挖 掘 共 确 定 了 1 7 7 个 调 节 代 谢 物 水 平 的 候 选 基 因 , 通 过 体 外 酶 活 反 应 验 证 了 T r a e s C S 3 A 0 1 G 2 9 6 9 0 0 ( 酪 氨 酸 脱 羧 酶 ) 和 T r a e s C S 4 B 0 1 G 0 5 5 3 0 0 / T r a e s C S 4 B 0 1 G 0 5 5 4 0 0 ( 酰 基 转 移 酶 ) , 并 进 一 步 利 用 a d v a n c e m e d i t a t i o n 小 麦 转 基 因 验 证 了 T r a e s C S 7 A 0 1 G 0 6 8 6 0 0 ( 氧 甲 基 转 移 酶 ) 和 T r a e s C S 2 A 0 1 G 0 7 0 1 0 0 ( 糖 基 转 移 酶 ) 。 3 . 动 态 m Q T L 的 分 析 : 三 个 时 期 能 够 定 位 到 重 合 和 特 异 性 的 m Q T L , 表 明 不 同 代 谢 产 物 在 代 谢 途 径 中 具 有 共 同 和 特 异 的 生 物 学 功 能 , 通 过 整 合 不 同 时 期 的 m Q T L 可 以 更 加 全 面 地 解 析 代 谢 通 路 。 4 . B M S 3 5 4 8 2 5 细 胞 培 养 小 麦 籽 粒 代 谢 网 络 的 构 建 : 通 过 整 合 三 个 阶 段 的 m Q T L 结 果 和 验 证 的 候 选 基 因 , 对 小 麦 籽 粒 中 代 谢 网 络 进 行 了 构 建 。 L Y 2 8 3 5 2 1 9 生 产 商 主 要 为 苯 丙 烷 下 游 的 黄 酮 代 谢 途 径 及 几 种 重 要 氨 基 酸 的 生 物 合 成 和 分 解 途 径 , 包 括 色 氨 酸 、 酪 氨 酸 和 精 氨 酸 下 游 的 酚 胺 代 谢 途 径 , 提 高 了 我 们 对 复 杂 代 谢 网 络 的 认 知 。 5 . 利 用 代 谢 组 学 研 究 农 艺 性 状 : 通 过 对 6 2 5 种 已 知 代 谢 物 与 7 种 农 艺 性 状 进 行 相 关 性 和 Q T L 共 定 位 分 析 , 发 现 有 4 4 个 农 艺 性 状 Q T L ( p Q T L ) 与 2 4 9 个 m Q T L 存 在 共 定 位 , 涉 及 1 9 5 种 代 谢 物 。 其 中 在 4 D 染 色 体 共 定 位 区 间 内 预 测 到 一 个 同 时 影 响 糖 类 物 质 积 累 和 千 粒 重 的 候 选 基 因 T r a e s C S 4 D 0 1 G 0 3 8 2 0 0 ( 糖 转 运 蛋 白 ) , 促 进 了 我 们 应 用 代 谢 组 学 解 析 小 麦 复 杂 农 艺 性 状 机 理 的 研 究 。 A u t h o r a d m i n P o s t e d o n M a y 1 0 , 2 0 2 5 P o s t s n a v i g a t i o n P a g e 1 P a g e 2 … P a g e 8 3 2 N e x t p a g e R e c e n t P o s t s 多 功 能 吲 哚 菁 绿 奥 沙 利 铂 纳 米 药 物 用 于 结 肠 癌 免 疫 增 敏 治 疗 骨 髓 增 生 异 常 综 合 征 血 清 T I M 3 、 I L 1 0 的 表 达 及 其 与 病 情 程 度 及 临 床 预 后 的 关 系 1 4 , 1 5 E E T 减 轻 脂 多 糖 诱 导 的 小 鼠 急 性 肺 损 伤 的 作 用 及 其 机 制 基 于 生 物 信 息 学 探 讨 中 药 调 节 软 骨 细 胞 铁 死 亡 干 预 膝 骨 性 关 节 炎 下 肢 深 静 脉 血 栓 患 者 发 生 急 性 肺 栓 塞 风 险 预 测 模 型 的 建 立 与 验 证 研 究 P D K 1 信 号 通 路 P r o u d l y p o w e r e d b y W o r d P r e s s 沪 I C P 备 1 4 0 2 9 4 7 6 号 1 4 沪 ( 浦 ) 应 急 管 危 经 许 [ 2 0 2 2 ] 2 0 2 1 7 1 ( Y S ) 沪 公 网 安 备 3 1 0 1 1 5 0 2 0 1 9 4 9 6 号

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